Jak używać pistoletu genowego

1. Przygotowanie materiału

Cienką warstwę pożywki umieszczono na 9 cm2 szalce do hodowli, a materiał (zwykle niedojrzałe zarodki, dojrzałe zarodki, małe kalusy, komórki zawiesinowe, protoplasty itp.) Wysiano na środku szalki o średnicy 3 cm .

2, traktowanie złota w proszku

Weź 60 mg proszku złota lub wolframu w probówce wirówkowej, dodaj 1 ml absolutnego etanolu, dobrze wstrząśnij przez 3 minuty, odwiruj dla 1 ziarna przy 9615 g, usuń supernatant, dodaj 1 ml jałowej wody i dobrze wymieszaj, wiruj przy 9615 g, powtórz krok 3 powyżej. Czasy. Na koniec złoty proszek zawieszono w 1 ml sterylnej wody destylowanej i przechowywano w 4 ° C lub w temperaturze pokojowej.

3, przetwarzanie DNA

Weź zawiesinę proszku o masie 50tA, dodaj roztwór 5-go plazmidu DNA (1,0 / lg ~ 1), 50 µl

0,1 mol / l spermidyny (zastosowany roztwór sterylizowano sterylnie), wytrząsano przez 3 min, pozostawiono w temperaturze pokojowej na 10 min, odwirowano przy 9615 g przez 10 s, odrzucono supernatant; dodać 250 ~ 1 absolutnego etanolu, wstrząsnąć, aby odwirować przy 9615 g przez 10 s i odrzucić supernatant. Osad ponownie zawieszono w 60/1 1 etanolu absolutnego i użyto do 5 strzałów (10 do 1 na strzał).

4, działanie pistoletu genowego

Wszystkie operacje działa genowego wykonywane są w warunkach aseptycznych, jak następuje:

1) Zdezynfekuj powierzchnię pistoletu genowego i komory próbki 70% etanolem. Jednocześnie siatkę barierową i rozszczepialną tarczę, nośnik mikroelastyczny, uchwyt i narzędzie do mocowania moczono przez 15 minut 70% etanolem, a następnie umieszczono na czystej ławce do wyschnięcia. Rozszczepialną membranę, stałą pokrywę i mikroelastyczne urządzenie uruchamiające nośnik można sterylizować powierzchniowo 70% etanolem i wysuszyć.

2) Włóż szkiełko mikrocząstek do pierścienia ustalającego i dodaj mieszaninę DNA i proszku złota do środka szkiełka mikrocząstek i wysusz przez około 1 minutę.

3) Zainstalować pękającą membranę na jej uchwycie i obrócić ją zgodnie z ruchem wskazówek zegara na przyspieszacz gazu.

4) Zainstaluj pierścień przestrzeni, siatkę blokującą, uchwyt siatki blokującej, nośnik cząstek i pierścień mocujący (powierzchnia z cząstkami skierowanymi w dół), dokręć pokrywę i włóż ją do chwytaka.

5) Umieść próbkę w komorze bombardowania i zamknij drzwi.

6) Otwórz główny zawór cylindra helowego i przekręć zawór regulacyjny helu w kierunku zgodnym z ruchem wskazówek zegara, tak aby wskazanie wskaźnika ciśnienia było wyższe niż ciśnienie membrany 200 psi (= 1,379 MPa).

7) Włącz pistolet genowy i przełącznik transformatora.

8) Naciśnij przycisk próżni. Gdy podciśnienie wynosi 26-28 cali Hg (= 88,05 ～ 94,82 kPa), naciśnij szybko przycisk Przytrzymaj, a następnie naciśnij i przytrzymaj przycisk uruchamiania i przytrzymaj go, aż zostanie aktywowany.

9) Naciśnij przycisk odpowietrzania, aby zresetować próbkę po wyzerowaniu stołu próżniowego.

10) Zamknij.

Dokręć główny wyłącznik cylindra helowego, uderz w pusty pistolet, ustaw wskaźnik manometru na zero, a następnie obróć zawór regulacji manometru w lewo; wyłączyć główny wyłącznik pistoletu genowego i przełącznik transformatora.