Program przygotowania próbki DNA pozostałości komórek gospodarza
May 21, 2021
Zostaw wiadomość
Rekombinowane leki białkowe, leki zawierające przeciwciała, szczepionki i inne produkty w produktach biologicznych są wyrażane i wytwarzane przez ciągłe linie komórkowe. Chociaż przeszły rygorystyczne procesy oczyszczania, w produktach nadal mogą znajdować się resztkowe fragmenty DNA komórek gospodarza (rDNA).
Te rDNA mogą wpływać na funkcję kluczowych genów receptora, tym samym stwarzając ryzyko zakaźności lub rakotwórczości.
Dlatego szczególnie ważne jest, jak skutecznie i stabilnie uzyskać śladowe ilości rDNA w próbce. Obecnie istnieją głównie następujące metody:
| Metody | Korzyść | Niekorzyść |
| Fenol / Chloroform | Wysoka czystość DNA i wysoka zawartość | Czasochłonne, uciążliwe i toksyczne czynności |
| Wytrącanie jodku sodu | łatwy w użyciu | Czasochłonna i niestabilna zawartość DNA |
| Metoda kolumnowa | Prosty i wysokiej czystości | Czasochłonne i trudne do zautomatyzowania |
| Metoda kulek magnetycznych | Prosty, o wysokiej czystości, może być zautomatyzowany | - |
 |
Ten schemat obróbki jest oparty na zasadzie metody kulek magnetycznych i jest stosowany w systemie obróbki wstępnej produktów biologicznych rDNA, który może realizować wydajny, prosty i zautomatyzowany system obróbki wstępnej.
Urządzenie SCIENTZ do automatycznej ekstrakcji kwasu nukleinowego jest wyposażone w dobrze znaną markę zestawu do wstępnej obróbki próbek DNA z komórek gospodarza (metoda kulek magnetycznych), a wskaźnik odzysku różnych próbek jest stabilny do ponad 80%, co może stabilnie i skutecznie kontrolować resztkowa zawartość DNA komórki gospodarza w różnych produktach biologicznych
Program eksperymentalny
Materiały eksperymentalne: automatyczny instrument do ekstrakcji kwasu nukleinowego (NP-2032), fluorescencyjny ilościowy instrument PCR (LightCycler480), zestaw do wstępnej obróbki próbek DNA z komórek gospodarza (metoda z użyciem kulek magnetycznych), zestaw do wykrywania liczby kopii genów CAR / TCR (metoda multipleksowego PCR- sondy fluorescencyjnej) )
Próbki eksperymentalne: próbki retrowirusów, próbki komórek CAR-T, kontrola negatywna
Kroki eksperymentalne:
Do monitorowania.
Przygotowanie eksperymentu - przygotowanie próbki - przygotowanie ekstrakcji - rozpoczęcie programu - wykrywanie całkowitej zawartości pozostałości
Uwagi: Instrument działa przez około 30 minut
Wyniki eksperymentalne:
| Nazwa próbki | MeanCp | MeanConc | Kwota odzyskana | Skalarny | Wskaźnik odzysku |
| Negatywna kontrola | 36.43 | 0.00 | - | - | - |
| Kontrola negatywna + (przenośna) | 18.67 | 86.62 | 8662.15 | 9707.85 | 89% |
| Negatywna kontrola | 18.72 | 53.47 | 8020.723657 | 9868.821045 | 81% |
| Próbka wirusa + | 19.15 | 63.10 | 8194.27 | 9707.85 | 84% |
| Próbka komórek | 20.21 | 32.93 | 2811.241943 | 2740.516576 | 102% |
Wyniki eksperymentalne:
Automatyczne przetwarzanie różnych próbek daje stabilne i wydajne wyniki;
Wydajność automatyzacji przetwarzania wsadowego jest wyższa niż wydajność ekstrakcji ręcznej;
Spełnia wymagania nowej stopy odzysku USP; może być dobrym pomocnikiem do wstępnego przetwarzania wykrywania rDNA w produktach biologicznych.
Wyświetlanie produktu:
 |